
革蘭氏染色——這個(gè)由丹麥科學(xué)家漢斯·革蘭在1884年發(fā)明的技術(shù),至今仍是微生物實(shí)驗(yàn)室的基石。依據(jù)細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分的不同,通過(guò)簡(jiǎn)單的紫色與紅色區(qū)分,它告訴我們眼前的細(xì)菌是革蘭氏陽(yáng)性(G+)還是革蘭氏陰性(G-),為細(xì)菌鑒定、感染診斷、抗生素選擇提供了最初步卻至關(guān)重要的依據(jù)。然而,正是這項(xiàng)看似基礎(chǔ)的技術(shù),卻讓無(wú)數(shù)檢驗(yàn)人員又愛(ài)又“恨"。
標(biāo)準(zhǔn)五步法,步步是挑戰(zhàn)
第一步:涂片與熱固定
制備涂片:取一滴無(wú)菌水或生理鹽水于載玻片中央,用無(wú)菌接種環(huán)挑取少量菌落,均勻涂布成直徑約1厘米的薄層膜。
風(fēng)干:在空氣中自然風(fēng)干。
固定:將有菌膜的一面朝上,快速通過(guò)酒精燈火焰2-3次。
取菌、涂片、過(guò)火固定——聽(tīng)起來(lái)簡(jiǎn)單,但菌量多少算合適?火焰溫度多高算剛好?菌量不足影響鏡檢,過(guò)熱則導(dǎo)致細(xì)胞變形。全憑手上功夫,新手往往需要數(shù)月練習(xí)才能穩(wěn)定發(fā)揮。
第二步:結(jié)晶紫初染(1分鐘)
用結(jié)晶紫染液覆蓋菌膜,開(kāi)始計(jì)時(shí),染色1分鐘。
用緩流自來(lái)水輕輕沖洗,洗去多余染液,甩干玻片上多余水分。
染液是否均勻?是否沉淀?這些細(xì)節(jié)都直接影響最終效果。
第三步:碘液媒染(1分鐘)
用碘液覆蓋菌膜,染色1分鐘。
再次用細(xì)緩水流輕輕沖洗,甩干。
碘液與結(jié)晶紫形成復(fù)合物,這是染色成敗的關(guān)鍵化學(xué)反應(yīng)之一。
第四步:乙醇脫色(5-15秒)
將載玻片傾斜,用95%乙醇滴流沖洗涂片,直至流下的乙醇幾乎無(wú)色(此過(guò)程通常僅需5-15秒,具體時(shí)間需經(jīng)驗(yàn)判斷)。
立即用緩流水輕輕沖洗,脫色結(jié)束。
這是整個(gè)流程中變數(shù)最大的一步。脫色不足,G-菌可能被誤判為G+;脫色過(guò)度,G+菌又會(huì)“變紅"成為假陰性。短短幾秒鐘的差異,可能導(dǎo)致相反的結(jié)論。
第五步:沙黃復(fù)染(30-60秒)
最后一步的復(fù)染為G-菌“上色",完成最終的色彩區(qū)分。
用沙黃染液覆蓋菌膜,復(fù)染30秒至1分鐘。
用細(xì)緩水流沖洗干凈,用吸水紙輕輕吸干或自然風(fēng)干,鏡檢觀察。

左:革蘭氏陰性菌(G-);右:革蘭氏陽(yáng)性菌(G+)
常見(jiàn)問(wèn)題解析:為什么你的結(jié)果可能不可靠?
脫色環(huán)節(jié)如何把握?為什么說(shuō)“失之毫厘,謬以千里"?
脫色是革蘭氏染色中最關(guān)鍵也最難標(biāo)準(zhǔn)化的一步,全憑操作者經(jīng)驗(yàn)控制時(shí)間:
脫色不足:G-菌本應(yīng)被脫去的結(jié)晶紫-碘復(fù)合物未被洗凈,復(fù)染后仍呈紫色,導(dǎo)致假陽(yáng)性
脫色過(guò)度:G+菌的復(fù)合物也被溶出,最終被染成紅色,造成假陰性
解決方案:需密切觀察流下乙醇的顏色變化,新手建議用標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì)照練習(xí)。
為什么會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不明確或顏色不典型?
菌齡過(guò)老:超過(guò)24-48小時(shí)的G+菌細(xì)胞壁可能降解,染色后呈紫紅混雜
涂片過(guò)厚:脫色劑無(wú)法滲入菌膜深層,造成內(nèi)部細(xì)菌脫色不勻
解決方案:使用18-24小時(shí)新鮮菌,制備薄而均勻的涂片。
染色后鏡檢,背景為什么有雜質(zhì)或沉淀?怎么辦?
多為染液沉淀或沖洗不當(dāng)所致。
解決方案:染液需過(guò)濾使用,每一步?jīng)_洗后應(yīng)將玻片充分瀝干。
熱固定時(shí)要注意什么?
固定不足:菌體在染色過(guò)程中被沖脫
過(guò)熱固定:細(xì)胞變形破裂,影響形態(tài)判斷
解決方案:玻片在火焰上快速通過(guò)2-3次,以不燙手背為宜。
為什么鏡檢時(shí)總找不到足夠細(xì)菌?
取菌量不足
涂片后沖洗水流過(guò)猛,沖走菌膜
解決方案:挑取適量菌苔,所有沖洗步驟使用緩流水。
傳統(tǒng)方法的三大困境
結(jié)果不一致:不同操作者、不同時(shí)間、不同狀態(tài),都可能得到不同的染色結(jié)果。
效率低下:?jiǎn)螐埐F暾鞒绦?-10分鐘,批量處理時(shí)更是耗時(shí)費(fèi)力。
質(zhì)量控制難:缺乏標(biāo)準(zhǔn)化流程,結(jié)果重復(fù)性難以保證。

破局:當(dāng)經(jīng)典技術(shù)遇上智能自動(dòng)化
針對(duì)這些長(zhǎng)期存在的實(shí)驗(yàn)室痛點(diǎn),我們推出了HD-GM100型全自動(dòng)革蘭氏染色儀——一款真正實(shí)現(xiàn)革蘭氏染色全流程自動(dòng)化的設(shè)備,將傳統(tǒng)依賴人工經(jīng)驗(yàn)的繁瑣步驟整合為智能化系統(tǒng),可顯著提升染色質(zhì)量與操作效率。

自動(dòng)化流程:上機(jī)后自動(dòng)執(zhí)行結(jié)晶紫初染→碘液媒染→乙醇脫色→品紅復(fù)染→離心干燥全流程
程序可編程:內(nèi)置9種預(yù)設(shè)程序,支持自定義各步驟時(shí)間與染色級(jí)別(1-9級(jí))
智能控制:脫色時(shí)間精準(zhǔn)可控,避免人工脫色不足或過(guò)度,杜絕假陽(yáng)性/假陰性
干燥高效:染色時(shí)低速運(yùn)轉(zhuǎn)(20rpm),甩干時(shí)高速離心(≥1500rpm),快速完成玻片干燥

高通量處理:單批次支持1-24張玻片同時(shí)染色,最佳裝片數(shù)12/16/24片
快速染色:標(biāo)準(zhǔn)流程最快≤4分鐘,每小時(shí)可處理≥200張玻片
均勻染色:直線噴霧法精準(zhǔn)覆蓋每張玻片,避免交叉污染,保證染色均勻性
連續(xù)運(yùn)行:支持批量連續(xù)作業(yè),滿足疾控、海關(guān)、科研等機(jī)構(gòu)大規(guī)模檢測(cè)需求

試劑節(jié)約:單張玻片試劑消耗僅0.5–1.5ml,智能控制用量
自動(dòng)清洗:內(nèi)置管路自動(dòng)清洗程序,無(wú)需人工拆洗,維護(hù)簡(jiǎn)便
即開(kāi)即用:出廠配置齊全(主機(jī)、玻片托盤(pán)、備用噴嘴、染料套裝),降低啟動(dòng)成本

臨床微生物實(shí)驗(yàn)室:快速準(zhǔn)確的病原菌初步鑒定,為臨床用藥提供及時(shí)依據(jù)
疾控與公共衛(wèi)生:大批量樣本篩查,應(yīng)對(duì)突發(fā)公共衛(wèi)生事件
科研與教學(xué):標(biāo)準(zhǔn)化染色結(jié)果,保障科研數(shù)據(jù)的可靠性;直觀的教學(xué)演示工具
第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu):提升檢測(cè)效率,保證報(bào)告質(zhì)量

不僅僅是替代,更是進(jìn)化
HD-GM100以自動(dòng)化重塑革蘭氏染色流程,為各類微生物實(shí)驗(yàn)室提供高效、一致、可追溯的染色解決方案,讓染色標(biāo)準(zhǔn)化,讓結(jié)果更可信。
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